新型克隆技术能将目标DNA通过一步反应直接克隆到环状目标载体

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日期:2020-01-21 16:52:31    来源:科技日报    

DNA分子克隆技术是分子生物学研究的基础,其创新和发展直接推动着分子生物学的进步。目前国内外使用的分子克隆方法有多种,各有优缺点,分子克隆领域尚未形成一种标准化的方法,且试剂盒价格昂贵。中国热带农业科学院研究人员日前开发了一种新型的实用分子克隆技术Nimble Cloning(简称NC克隆技术),能将目标DNA通过一步反应直接克隆到环状目标载体。

该技术论文近期发表在国际期刊《生物工程与生物技术前沿》(Frontiers in Bioengineering and Biotechnology),中国热带农业科学院生物所言普副研究员和周鹏研究员为该文通讯作者。

言普介绍,NC克隆技术与现有分子克隆技术相比,具有以下优点:一是直接将DNA克隆到环状载体,避免了载体的线性化酶切和回收等步骤,不仅简化了实验操作,还提高了克隆效率。二是使用灵活,用途广泛。基因扩增技术(PCR)产物和环状质粒上的DNA均可克隆到目标载体,并且可用于单片段、多片段和多位点等多种形式的克隆。三是可灵活用于标准化克隆和无缝克隆。基因加带通用接头序列后可克隆到系统任何一个载体,形成一个标准化的克隆系统。如有不使用通用接头序列的无缝克隆要求,只需将目标基因与载体的重叠序列设计在通用接头的外围,通用接头可在克隆反应中消除,在不改变载体的情况下实现无缝克隆。

为了方便NC克隆技术的推广使用,言普等还构建了一系列配套的系统表达载体,包括原核表达、酵母双杂交、植物过表达、植物RNAi、植物亚细胞定位、植物BiFC、植物基因编辑、植物VIGS、哺乳动物表达载体等,初步形成了一个标准化的克隆系统,为基因功能研究提供了一个便利的技术平台。该套载体向科研人员开放共享,可免费索取使用。

据悉,该技术已在中科院华南植物园、华南农业大学、华中农业大学、四川农业大学、东北林业大学、西北工业大学、扬州大学、海南大学等10多家科研单位使用,取得了良好的使用效果,有望成为分子克隆领域的标准系统。(王祝华)

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